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淺析外側韁核注射腺苷對正常大鼠鎮痛的影響

作者:2017-06-03 18:13文章來源:未知
  腺苷(Ado)是腺苷一磷酸去磷酸后的產物,作為中樞神經系統(CNS)的一種神經調質,它可降低CNS 神經元的興奮性,在中樞許多部位具有抑制作用。Ado 是由腺嘌呤的N-9 與D-核糖的C-1,通過β-N9-糖苷鍵構成的核苷。Ado 形成于胞內或者細胞膜表面,主要來自于胞內外核苷酸的分解。研究表明,Ado 在CNS 中直接或間接參與睡眠、機體防御、鎮靜及鎮痛等作用。Ado 對大鼠內側韁核(Hb) 神經元自發放電起抑制作用,對外側Hb 神經元自發放電則有興奮作用。Hb 是在鎮痛作用中非常重要的核團,在大腦中作為邊緣前腦到腦干背側通路上一個重要樞紐,許多參與痛覺調節的部位都與Hb 有密切的關系,Hb 存在于脊椎動物的背側間腦,可分為內側MHb和外側Hb(LHb),痛興奮性和痛抑制性兩類神經元在MHb和LHb 內對傷害性的刺激表現出不同的反應。而LHb 又作為邊緣系統與中腦相同的樞紐,有痛的抑制性神經元。有關Ado 在LHb 內對大鼠痛覺調節的影響國內外尚未見報道。本實驗分析Ado 參與LHb 對正常大鼠痛覺的調節作用,為揭示Ado 在CNS 內鎮痛作用的機制提供新的位點,并為Ado 受體的臨床應用提供依據。
  1 材料與方法
  1. 1 材料成年雄性Wistar 大鼠( 由吉林大學白求恩醫學院動物中心提供) 12 只,體重180 ~ 210 g,實驗期間進行分籠飼養,自由飲水與進食,并接受自然光照,飼養室溫度維持在20℃ ~ 24℃。試劑藥品有Ado(上海強耀生物科技公司提供)用生理鹽水配置為0. 1、0. 5、1. 0、2. 0 nmol,醫用酒精,H2O2,10%水合氯醛,亞甲基藍,牙托粉和牙脫水等。實驗器材為電子測壓儀(LYS-3E),智能熱板儀(YLS-6B),均由安徽淮北正華生物儀器設備有限公司生產,腦立體定位儀(由深圳瑞沃德公司生產,68001);體重測量儀,微量注射器,PE 連接管;手術器械等。1. 2 實驗方法①實驗準備:為了保證實驗質量減小誤差,需對大鼠進行前期的熱板和壓板訓練,使大鼠的反應的潛伏期(HWL)維持在一個相對穩定的范圍,依據孫衍剛等方法,訓練7 d,每天3 輪,每輪3 次,使熱板測試的反應時間在2 ~ 3 s,壓力測試的反應時間在5~ 8 s。②核團的微量注射:用10%水合氯醛對大鼠進行腹腔麻醉,在用酒精消毒的條件下,將大鼠的頭部水平固定在腦立體定位儀上,后將頭骨暴露,參考Watson鼠圖譜在LHb 定位,插入焊接好的不銹鋼套管,并用牙托粉和牙托水固定,封住套管和顱骨之間的縫隙。術后讓大鼠恢復2~ 3 d 后再進行1~ 2 d 的壓板與熱板的訓練,開始行為痛覺的測試。Ado 需要低溫保存,并現用現配,進行核團注射藥物前需要保證套管的通暢,將注射器插入套管,緩慢注射藥物,時間控制在90~ 120 s,每次注射后應該使注射針在套管中停留片刻取出。③行為痛覺的測試:注射藥物前需要測量一輪大鼠的HWL 作為基礎值,以注射藥物后各時間點的HWL 與之對比出現變化的百分比作為結論分析的參考值。測量過程中為了避免對組織的損傷,設定的測定量都有一個極限值不可超過,在注射藥物后特定時間點(5、10、20、30、45、60 min) 對大鼠的HWL 進行測量。④熱板測試: 熱板的溫度控制在51. 8℃ ~52. 2℃,將大鼠待測的后爪緊貼于熱板上,開始計時,待大鼠后爪感覺疼痛主動縮回時,測試計時結束。⑤壓板測試:用壓力測試儀對大鼠進行壓力測試,同樣將大鼠待測后爪放在趾壓板上,接觸面應在大鼠后爪的趾關節處,待大鼠感覺疼痛主動縮回時,停止壓力計量。記錄注射Ado 的和注射生理鹽水對照組
  HWL。
  1. 3 統計學處理采用獨立樣本t 檢驗。
  2 結果
  LHb 內微量注射0. 1 nmol Ado 與對照組相比,左、右爪機于曉利等 外側韁核注射腺苷對正常大鼠鎮痛的影響 第 24 期 ·6097·械刺激的HWL 均有極顯著差異(P<0. 001,P<0. 001),左、右爪熱刺激的HWL 均無明顯差異(P>0. 05,P>0. 05);0. 5 nmol Ado引起大鼠左、右爪機械刺激的HWL 均有極顯著差異( P <0. 001,P<0. 001),左、右爪熱刺激的HWL 均無明顯差異(P>0. 05,P>0. 05);1. 0 nmol Ado 與對照組相比,左爪熱刺激的HWL 有顯著差異(P<0. 01),右爪熱刺激的HWL 有差異(P<0. 05),左、右爪機械刺激的HWL 均有極顯著差異(P<0. 001,P<0. 001) ;2. 0 nmol Ado 引起左、右爪熱刺激和機械刺激的HWL 均有極顯著差異( P< 0. 001,P< 0. 001)。不同濃度Ado在LHb 內對正常大鼠具有鎮痛作用,這種鎮痛作用具有一定的劑量依賴性和時間規律性。
  3 討論
  Hb 位于邊緣并作為中腦環路中一個重要的中轉站,是多種生理功能的匯聚點,其神經元的電活動具有明顯的晝夜節律性。Ado 是一種在體內廣泛存在的神經調質,特別在中樞神經系統中發揮著重要的作用,并且在早期被證明在外周神經系統中Ado 通過不同受體介導,在痛覺傳導通路中發揮著重要的作用。而Ado 的主要來源與ATP 密切相關。ATP 是廣泛存在于周圍和中樞神經系統的神經遞質,與疼痛密切相關。在炎癥反應及神經損傷時,ATP 作為一種疼痛介質激活感覺傳入纖維。在外周組織中ATP 有神經元以及非神經元釋放兩種來源。有研究者把Ado 的相應受體(A1R,A2R,A3R) 放在外周痛覺信息調控中探究其作用,發現A1R 在術后,炎癥等鎮痛中具有重要的作用,其中對A2R 激動劑CGS61280 親和力低的A2BR 有痛覺傳導作用,其選擇性拮抗劑與A1R 均可減少急性與炎癥痛的相關行為,A3R 的激活具有促炎作用,可作為治療炎癥痛的新起點。最后證明了大鼠在Ado 釋放相應增加時,受A1R 的影響,痛敏程度下降,且主要表現為脊髓水平上的鎮痛。聯系Ado 可增加LHb 神經元的放電,對LHb 神經元有興奮作用,同時再與同樣有研究表明的可卡因可直接對LHb 作用,可提高LHb 神經元的興奮性,抑制其對痛的誘發反應這一結論相結合,得出在正常大鼠的LHb 中微量注射Ado對大鼠鎮痛作用的可能機制是LHb 具有與痛覺相關的神經元,而Ado 可以增加LHb 內神經元的放電,提高神經元的興奮性,結合Ado 中A1R 受體在疼痛中的鎮痛調節作用,導致大鼠痛覺敏感程度下降從而起到鎮痛作用。但是對于在痛覺調節中Ado促進釋放的神經元和Ado 不同受體的結合和結合后與痛覺調節相作用具體的生理機制還有待于做進一步的研究。
 

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