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細胞培養室的滅菌與消毒

2017/10/8 16:31:53??????點擊:



細胞培養對無菌環境的要求較為嚴格。細胞培養間的殺菌主要涉及空氣的殺菌,其常見的四種方法如下:


1、甲醛熏蒸

甲醛是一種高效能化學滅菌劑。不易燃、不爆炸、不腐蝕金屬。它能與蛋白質中的氨基酸結合而使蛋白變性,使酶的活性消失。故有強大的殺菌作用。一般稱作為“大消”,用來對細胞間進行徹底的消毒殺菌。但是甲醛是一種對人體有害的物質,并且細胞培養實驗室一般空氣流通都很差,甲醛的排出也很慢,至少要一周以上。如果要緊急使用的話,在甲醛滅菌完后,可以用等量的氨水中和空氣中的甲醛。


2、空氣過濾(恒溫恒濕裝置)

這是一種最安全,殺毒效果也最好的方法,只是費用較為昂貴。衡量空氣潔凈度的級別標準如下表1。

表1 潔凈室(區)空氣潔凈度級別表

潔凈度級別 塵粒最大允許數/立方米 微生物最大允許數/立方米 浮游菌/立方米 沉降菌/皿

100級 3500 0 5 1

10000級 350000 2000 100 3

100000級 3500000 20000 500 10

300000級 10350000 60000 - 15


3、紫外線燈殺菌

紫外線滅菌是用紫外線管照射進行的。波長在220-300nm的紫外線稱為“殺生命區”,其中以260nm的殺菌力最強。紫外線作用于細胞DNA,使DNA鏈上相鄰的嘧啶堿形成嘧啶二聚體(如胸腺嘧啶二聚體),抑制了DNA復制。另外,空氣在紫外線照射下可以產生臭氧,臭氧也有一定的殺菌作用。紫外線透過物質的能力很差,適用于空氣及物體表面的滅菌,與被照物的距離以不超過1.2m為易,照射時間以紫外線燈管的功率大小、被照空間及面積大小,根據滅菌效果測定結果而定。由于上述各種情況的不確定性,導致紫外線殺菌效果不是很理想,一般需要過夜殺菌。此外紫外線對人體有傷害作用,不要在紫外線燈照射下進行操作。


4、電子消毒滅菌器殺菌

即臭氧滅菌。在高壓電場作用下,電子管的內外電極發生強烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧在常溫、常壓下分子結構不穩定,很快自行分解成氧氣(O2)和單個氧原子(O);后者具有很強的活性,能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應,從而靠氧原子的彌漫性擴散達到殺菌之目的,消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留的多余氧原子只需30~40min則會自行重新結合成為普通氧原子(O2),不存在任何有毒殘留物,故稱無污染消毒劑,它不但對各種細菌(包括肝炎病毒,大腸桿菌,綠濃桿菌及雜菌等)有極強的殺滅能力,而且對殺死霉素也很有效。


此外,細胞培養間的地板也應定期使用新潔爾滅進行消毒滅菌,并打掃干凈;培養箱、桌面定期用75%的酒精進行擦拭消毒,防止污染。


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