推薦產品???case
聯系我們???Contact
你的位置:首頁 > 推薦產品

超敏型 ECL化學發光底物試劑盒

2017/3/11 22:29:26

暫無圖片。

詳細介紹

超敏型 ECL化學發光底物試劑盒


下載:超敏型 ECL化學發光底物試劑盒

 

試劑盒組成:

貨號

組份

數量

價格

ECL-P-100

A 

50mL

310

B 

50mL

說明書

ECL-P-500

A 

250mL

1218

B 

250mL

說明書

 

儲存:避光保存,室溫可保持穩定兩年以上;長期不用,建議置于oC保存延長有效期。


對于不同的蛋白豐度和曝光靈敏度,可選擇不同類型的ECL化學發光底物試劑盒:

 超敏型 ECL化學發光底物試劑盒(超敏型ECL發光液)可達到高飛克級靈敏度,且有超長的保質期,  http://www.hcgdietersource.com/Product/2450382332.html;

如需要更高靈敏度,可選擇低飛克級的極敏型 ECL化學發光底物試劑盒(極敏型ECL發光液),  http://www.hcgdietersource.com/Product/1082953028.html;

如蛋白豐度較高,可以選擇納克級的增強型 ECL化學發光底物試劑盒(增強型ECL發光液),以達到更好的曝光效果,  http://www.hcgdietersource.com/Product/0294753539.html 。

一、產品簡介

ECL化學發光底物試劑盒,常稱為ECL發光液,屬于非放射性發光系統,用于檢測固定在膜上的帶HRP標記的蛋白或核酸。超敏型ECL化學發光底物試劑盒(超敏型ECL發光液)采用了新型發光增強系統:1,發光強度更高,具有靈敏度高、背景低的特點,最低檢測靈敏度可達高飛克(femtogram)級,適用于檢測痕量蛋白或核酸;2,發光信號持久,所采用的獨特配方足以維持24小時以上的發光,便于反復曝光操作。與普通 ECL 發光液相比,可明顯減少一抗和二抗的使用量,且保質期長,可在室溫長期保存。

 

二、原理:

超敏型ECL化學發光底物試劑盒(超敏型ECL發光液)用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以HRP標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于本產品配制的ECL工作液中,室溫孵育數分鐘,HRP使工作液中的魯米諾(Luminol)氧化并發光,試劑中添加的增強劑可以使得這種發光大大增強。此光經X光膠片或者電子裝置感光記錄下來,可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。

 

三、產品優點:

高飛克級靈敏度——高靈敏性,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,最低可檢測約300飛克(femtogram)的蛋白量。

信號穩定——發光時間長,能進行多次曝光,30min仍可保持約90%的發光強度,24小時后仍能維持60%以上的發光強度。

信號強——發光信號比經典的對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系更強。

穩定性高——試劑盒可在室溫長期穩定存放。

節約抗體——需要更少(稀釋更多)的一抗和二抗,特別節省抗體(推薦用量:一抗0.02-1.0μg/mL,二抗4-20ng/mL)。

 

四、使用方法:

1. 印跡膜制備:執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發光底物,檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。

2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均勻并盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約1分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號顯現:

1). 用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜完全干燥;

2). 將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡;

3). 用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光;

4). 根據信號的強弱適當調整曝光時間,也可選擇不同時間多次曝光,以達最佳效果。

 

五、安全性:

無特殊毒性,按普通化學品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸,請立刻用大量清水沖洗。

 

六、注意事項:

1.由于不同品牌的抗體質量不同,以及抗體的保存條件和保存時間的不同,初次使用時建議對抗體用量進行優化,以取得最優效果。

2.勿將ECL化學發光底物試劑盒(ECL發光液)暴露在陽光或強光下,否則會導致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時間暴露在陽光下,實驗室光照對試劑盒影響不大;除了X光膠片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作。

3.使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態;使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。

4.使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時一定要用不同的槍頭,互相污染可能導致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑。

5.印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發出的光最強,然后隨著時間的延長而緩慢減弱,至30min仍可保持90%的光信號,至24小時仍可保持約60%的光信號;蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間;使用過少的ECL工作液不利反應進行,為達節約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。

6.使用生物素/親和素體系時,避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素,容易產生非特異性信號。

7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金屬氧化物顆??赡軙斐赡ど铣霈F顆粒狀斑點,避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,建議使用塑料的平頭鑷子。

9.疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,應避免使用NaN3,如必須使用,濃度不要超過0.01%。

10. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干凈。

11.本產品僅供研究使用。

 

 

常見問題:


問題

可能原因

解決方案

膠片反相(白色條帶,黑色背景)

 


體系中HRP過量

 


HRP標記物稀釋10倍以上

印跡膜上出現棕色或黃色條帶

膜在暗室中發光出強烈熒光

發光信號持續時間短于8小時

 

 

信號太弱或者無信號

體系HRP,

消耗過快

HRP標記物稀釋10倍以上

抗原或抗體不足

提高抗原或抗體濃度

蛋白轉移率低

優化電轉條件

HRP或者底物活性太低

**參考下面的注釋

 

 

 

背景過高

體系中HRP過量

HRP稀釋10倍以上

封閉不充分

優化封閉條件

封閉試劑不合適

更換封閉液

清洗不充分

延長清洗時間、次數及清洗的體積

膠片曝光過度

減少曝光時間

抗原或抗體的濃度過高

減少抗原或抗體的濃度

 

蛋白條帶為點狀

蛋白電轉失敗

優化電轉條件

膜未平衡

按說明書將膜平衡

膜和膠片之間有氣泡

曝光之前去除氣泡

出現非特異性條帶

體系中HRP過量

HRP標記物稀釋10倍以上

SDS引起的非特異性結合

Western blot 過程中避免使用SDS

                     **檢測底物的活性:準備1-2mL底物工作液,于暗室中加入1μL稀釋的HRP結合物,工作液將會立馬發出熒光,隨后熒光淬滅。

更多圖片
成上人色爱